背景:
IdeS是僅在鉸鏈區下方的一個特定位點裂解IgG以產生F(ab')2和Fc片段的免疫球蛋白降解酶。Rhinogen? IdeS protease是利用E.coli系統重組表達生產,并經過分子改造得到的重組IdeS蛋白。其含有His標簽,在酶切完成后很容易從酶切反應體系中分離去除。IdeS蛋白酶在生理條件下切割IgG,從而保持免疫反應性。在pH 6.0~8.0范圍的常用緩沖液中,IdeS蛋白酶可有效切割多種抗體。經過改造后的IdeS蛋白酶具有更高的酶活和更廣的底物特異性,除可酶切人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外,還對小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。
包裝規格:
Rhinogen? IdeS protease包裝規格如下:
目錄號 |
規格 |
QIP-001-A |
5000U |
QIP-001-B |
5×5000U |
QIP-001-C |
1000U |
QIP-001是凍干粉制劑產品,制劑緩沖液為20mM Tris,50mM NaCl,1mM EDTA,pH 7.5。
產品來源:
Rhinogen? IdeS protease是利用E. coli表達系統重組表達生產并經過分子改造得到的重組IdeS蛋白酶,分子量大小約為36kDa。
產品質量:
SDS-PAGE分析,純度≥95%。
產品特性:
最適pH為6.0~8.0。
酶活定義:
1個酶活力單位定義:37°C條件下,30分鐘內酶切1μg重組單克隆IgG所需要的酶量。
儲存條件:
1. 采用冰袋或干冰運輸, 收到產品后請立即將其置于-30℃至 -10℃凍存;
2. 使用前,用無菌水溶解IdeS protease凍干粉末。溶解后,2~8℃存放,若無菌取用,有效期為30天。
產品特點:
Rhinogen? IdeS protease是一種高度純化和非常穩定的重組蛋白酶,具有穩定性高、比活性高等特點。適用于重組抗體藥物的結構表征分析。
1. 高比活性:有效切割抗體下鉸鏈,獲得F(ab’)2和Fc片段;
2. 廣泛的底物特異性:除對人IgG1~4、猴、羊、兔IgG有酶切活力外,還對小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性;
3. 無動物源性:重組生產,無外源性的病毒污染,生產過程不使用任何動物源原料;
4. 高穩定性:每批產品都經過嚴格的質量控制,以實現產品批間穩定性。
應用:
特定位點裂解IgG以產生F(ab’)2和Fc片段。
使用建議:
1、試劑準備:
1) 使用前,請將Rhinogen? IdeS protease取出,10000rpm離心10秒,確保所有干粉都在管底;
2)用去離子水將Rhinogen? IdeS protease干粉溶解成50units/μl溶液。
2、推薦使用方法:
1)在消化緩沖液或其他相容緩沖液中加入所需量的IgG(0.5~10mg/ml);
2)將Rhinogen? IdeS protease加入至IgG樣品中;
注意:每1μg IgG加1 unit IdeS蛋白酶進行消化;例如,加入1μl(50 units)IdeS溶液以消化50μg的IgG;
3)在37℃條件下孵育30~60分鐘。
操作說明:
Rhinogen? IdeS protease能有效地切割人類,人源化,嵌合,羊,兔和猴IgG,并對小鼠IgG2a和IgG3具有較高活性。Rhinogen? IdeS protease也能切割許多Fc-融合蛋白以及抗體藥物偶聯物(antibody drug conjugates ,ADCs);
1. IdeS protease不能切割小鼠IgG1 / IgG2b,大鼠,豬,牛或山羊IgG。此外,它不能切割非IgG同種型,包括IgA,IgM,IgD和IgE;