背景：

       科學研究表明，人體中存在的蛋白質超過50%是以糖蛋白的形式存在。蛋白質糖基化作為生物體內最重要的蛋白質翻譯后修飾形式之一，具有重要的生物學功能，不僅影響蛋白質的空間構象、生物活性、運輸及定位等，而且還參與分子識別、細胞通信、細胞分化、信號轉導、免疫應答等等在內的各種重要生命活動。在多種疾病，如腫瘤（FDA已批準的用于癌癥疾病診斷和監控的生物標志物中大部分是糖蛋白）、神經退行性疾病、心血管病、代謝性疾病、免疫性疾病及感染性疾病的發生發展中均伴隨著蛋白質糖基化程度及糖鏈結構異常的發生。此外，糖基化還顯著影響生物治療劑的生物活性、靶標、運輸、血清半衰期、清除率及受體識別等性質。例如，重組促紅細胞生成素的藥代動力學和效力受其糖基化狀態的嚴重影響，而單克隆抗體通過ADCC介導功效的能力受Fc區巖藻糖含量的影響，因此蛋白質糖基化研究是繼核酸、蛋白質之后生命科學中又一極具潛力的研究領域，具有重要理論及應用意義。FDA要求所有類型的糖蛋白都需要進行糖型分析。

       來源于Flavobacterium meningsepticum 的肽N-糖苷酶F（PNGase F，EC 3.5.1.52）是從糖蛋白中特異性除去N-連聚糖的糖苷內切酶，是一類重要的糖基化研究的工具酶，被廣泛用于治療性蛋白質上N-連糖鏈位點、結構信息及功能關系的研究。Rhinogen^? PNGase F（Glycerol-free）是表達于大腸桿菌 BL21中的重組PNGase F，能夠將絕大多數N-糖鏈（除含α-1,3連接的核心巖藻糖，常見于植物及昆蟲糖蛋白）完整地從其所連接的蛋白分子上釋放下來，可以在 N-連糖肽或糖蛋白的高甘露糖、雜合和復雜寡糖部分最內側的 N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基（Asn）之間進行切割，釋放出完整的寡糖鏈，如圖1A。在釋放糖鏈的同時將氨基酸特征序列上的天冬酰胺殘基轉化為天冬氨酸殘基，其賦予蛋白質+ 1Da質量變化，如圖1B。它對多種底物具有高度活性，包括純化的糖蛋白和人血清糖蛋白的復合混合物。此外，由于不含甘油，在非變性條件下，酶與HPLC及質譜工作流程環境兼容。連接到N-連寡糖的磷酸鹽，硫酸鹽和唾液酸基團不影響N-糖鏈的釋放。

圖1A. PNGase F特異性切割位點；圖1B. PNGase F釋放糖鏈的反應機制

產品包裝：

       Rhinogen^? PNGase F（Glycerol-free）包裝規格如下：

儲存體系：

       QPF-001儲存在緩沖液中，以液體的形式提供。緩沖液的組成為：50 mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C)，5 mM EDTA ，本品不含甘油，與下游HPLC、MS分析兼容。

配套試劑：

產品來源：

       Rhinogen^? PNGase F（Glycerol-free）是一種將來源于Flavobacterium meningsepticum 的PNGase F基因重組到pET28aT7啟動子下游，并在大腸桿菌BL21中進行表達后分離得到的重組糖苷酶，其分子量大小為36KDa。

產品質量：

       SDS-PAGE分析，純度≥95%；沒有檢測到污染的外切糖苷酶、糖苷內切酶及蛋白酶活性。

產品特性：

       最適反應pH：7.5；熱失活條件：75°C處理10 min。

酶活定義：

       1個酶活力單位定義：在10 μl反應體系中，37°C，pH7.5條件下，1小時內催化釋放10μg變性RNase B＞95%N-連寡糖所需要的酶量。

       1U Rhinogen^? PNGase F=1 unit NEB PNGase F。不同公司產品的酶活力單位換算，請參考活力單位轉換表，如下： 

保藏條件：

       采用冰袋運輸，收到產品后請立即將酶置于4℃，嚴禁凍存；配套試劑置于-20℃儲存。本品不含防腐劑，務必確保無菌操作取用，避免污染。 

應用：

       1. 從糖肽及糖蛋白上釋放完整的N-連聚糖；

       2. 表征蛋白質是否糖基化；

       3. 用于分子量檢測或晶體學研究時去糖基化蛋白質的制備；

       4. N-糖基化糖蛋白的結構-功能研究；

       5. 糖基化位點的確定。