背景:
Rhinogen? IdeS protease是利用E. coli表達系統重組表達生產并經過分子改造得到的重組IdeS蛋白酶,分子量大小約為36kDa。其僅在鉸鏈區下方的一個特定位點裂解IgG以產生F(ab')2和Fc片段。且在生理條件下切割IgG,從而保持免疫原性。在pH 6.0~8.0范圍的常用緩沖液中,IdeS蛋白酶可有效切割多種抗體。經過改造后的IdeS蛋白酶具有更高的酶活和更廣的底物特異性,除可酶切人IgG1~4(切割位點如下表1)、猴、羊、兔IgG外,還對小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。
Rhinogen? Immobilized IdeS,Microspin是一種將Rhinogen? IdeS protease共價偶聯到瓊脂糖珠的樹脂,可在特定位點裂解IgG以產生F(ab')2和Fc片段。消化完成后的溶液內,可得到F(ab')2和Fc片段,而不含IdeS酶。
包裝規格:
Rhinogen? Immobilized IdeS,Microspin包裝規格如下:
目錄號
規格
QIP-101-A
1支
QIP-101-B
5支
QIP-101-C
10支
一支Immobilized IdeS,Microspin可用于消化0.5mg IgG。
產品儲存于20%乙醇中,不添加防腐劑。
儲存條件:
采用冰袋運輸,Immobilized IdeS,Microspin產品儲存于20%乙醇中,收到產品后請立即將其置于2-8℃保存。避免凍存!
產品特點:
Rhinogen? Immobilized IdeS,Microspin具有如下特性:
1. 使用方便:消化完成后,通過離心即可分離得到消化產物;
2. 回收率高:F(ab')2回收率>85%以上;
3. 穩定性高:每批產品都經過嚴格的質量控制,以實現產品批間穩定性。
應用:
重組抗體藥物的結構表征分析。
操作說明:
1. Rhinogen? Immobolized IdeS,Microspin能有效地用于酶切人類、人源化、嵌合、羊、兔和猴的IgG,并對小鼠IgG2a和IgG3也具有中等活性。同時也適用于許多Fc-融合蛋白以及抗體藥物綴合物(antibody drug conjugates,ADCs)的酶切;不適用于小鼠IgG1/IgG2b、大鼠、豬、牛或山羊IgG。此外,它不能切割非IgG同種型,包括IgA、IgM、IgD和IgE;
2. 對于小鼠IgG2a和小鼠IgG3的切割,建議適度提高孵育溫度(酶切溫度越接近37℃,則酶活越高)及孵育時間(2小時至過夜);
3. 理想的IgG濃度應在0.5-20mg/ml的范圍內;
4. 通過SDS-PAGE很容易確定IgG的切割;
5. 將消化產物與protein A磁珠孵育30~60分鐘后,可以獲得純化的F(ab’)2片段;另瑞安生物可提供產品 Rhinogen? Immobolized IdeS Cut-Pure Kit,Microspin(貨號:QIP-102),內包含Immobilized IdeS,Microspin及Protein A純化柱;
6. 最適的酶切反應緩沖液pH為6.0~8.0,在低于pH5.0體系中,IdeS 固定化酶會不可逆的失活,在高于pH8.0體系中需要適當延長/優化反應條件;
7. 本產品僅供研究使用,不適用于人或動物的診斷及治療用途。