熒光素酶 (luciferase) 報告基因系統是一種以熒光素 (luciferin) 為底物來檢測熒光素酶活性的報告系統。相比于熒光蛋白，該系統具有靈敏度高，讀數結果穩定等優點。近幾年，隨著生物醫藥的蓬勃發展，越來越多的藥物選擇熒光素酶報告基因系統作為生物學活性檢測系統。Avelumab（Bavencio）是一個人IgG1抗PD-L1的人源化單克隆抗體，可解除PD-1/PD-L1介導的免疫抑制，促進T細胞攻擊腫瘤細胞。Avelumab于2017年3月24日獲FDA批準上市，用于成人和12歲以上兒童的轉移性默克爾細胞瘤（皮膚癌的一種）的治療。本文闡述了一種利用CD16A-NFAT-Luc報告基因系統評價Avelumab ADCC效應的方法，該法相較于傳統PBMC/NK原代細胞的ADCC檢測方法，具有操作更簡單，材料更易獲得且方法的靈敏度和精密度更高的優勢。
1、靶細胞的處理
消化并離心收集PD-L1/CHO， PBS洗滌兩遍后用assay medium（RPMI1640）重懸，并將細胞密度調整為1×106 cells/mL，備用。
2、供試品處理
用assay medium將供試品稀釋至30 nM，然后再4倍梯度稀釋至第8個濃度點，備用。
3、效應細胞處理
離心收集CD16A-NFAT-Luc效應細胞，PBS洗滌兩遍后再用assay medium重懸，并將細胞密度調整為5×106cells/mL，備用。
4、孵育
在96孔白色平底板中，分別加入30 μL靶細胞，30 μL上述梯度稀釋的供試品，于37℃預孵育30分鐘。再加入30 μL效應細胞，混合后放入CO2培養箱中培養5~6 h。
5、檢測
預先取出配制好的Bio-Glory螢火蟲熒光素酶檢測試劑使其恢復至室溫，每孔加入90 μL Bio-Glory試劑，靜置5min后，用酶標儀收集化學發光信號。
RHINOBIO
酶標儀檢測化學發光信號值（RLU），以濃度為橫坐標，RLU值為縱坐標，利用SoftMax軟件進行四參數擬合，試驗結果詳見圖1。結果表明Avelumab型可誘導明顯的ADCC效應，且有良好的量效關系。同時表明該體系可用于抗體類分子ADCC效應的檢測。
1、針對不同的靶細胞和效應細胞，需要摸索合適的效靶比以獲得較高的信噪比。
2、效應細胞和靶細胞在做實驗前均需要用PBS洗滌，以去除FBS對檢測的影響。
3、報告基因的表達會隨著時間呈現先上升后下降的趨勢，需要控制孵育時間，并不是時間越長越好。
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