藥物的質量控制包括生產過程以及終產品的質量控制。重組蛋白藥物因其特殊的結構通常需要哺乳動物表達體系制備，但由于其來源和生產工藝的特殊性，安全性需要額外關注。利用哺乳動物生產藥物的過程包括工程細胞的構建及傳代擴增、細胞培養、抗體純化和制劑。重組抗體藥物生產的質量控制包括生產細胞的質量控制和產品的質量控制。
其中，細胞的質量控制主要包括以下幾個方面：細胞鑒別、細菌和真菌檢測檢查、分支桿菌檢查、支原體檢查、外源因子和內源因子的檢查、成瘤性/致瘤性檢查等。細胞庫是整個生產過程的原材料，監管部門要求進行全面的檢測。下圖為主細胞庫（MCB）的鑒定和檢測要求。
關于細胞庫檢定相應的法規如下
必須證明用于生物制品生產的細胞基質不含外源因子，包括支原體。支原體污染檢測必須在產品開發的各個階段進行，包括原材料、細胞庫（MCB+WCB+EOPC）、病毒種子庫、未加工的收獲液和最終產品。
美國藥典＜USP＞63中指出需要用兩種方法檢測支原體污染：（A）瓊脂－肉湯培養法（B）指示細胞法。并提到經驗證的核酸擴增方法（NAT）或酶學方法可以用于檢測支原體，但前提是該方法經驗證可與培養法和指示細胞法等效。
歐洲藥典EP2.6.7中也要求培養法和指示細胞法同時檢測，并且更詳細地介紹了NAT方法代替前1或2種方法的具體驗證要求。直接NAT法可以在有細胞毒性的材料中應用或需要快速方法時使用。細胞培養富集后NAT方法適合于待檢樣品與指示細胞共培養一段時間后，從細胞和上清中提取核酸，再通過NAT檢測。
中國藥典3301指出主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批、對照細胞以及臨床治療用細胞進行支原體檢查時，應同時進行培養法和指示細胞培養法（DNA染色法）。病毒類疫苗的病毒收獲液、原液采用培養法檢查支原體；必要時，亦可采用指示細胞培養法篩選培養基。也可采用經國家藥品檢定機構認可的其他方法。
培養法
傳統的支原體檢測采用培養法，是將待測樣品接種到合適的液體培養基繁殖，然后再接種到固體培養基中，培養一個月后觀察固體培養基中是否有“油煎蛋”菌落出現，如若有則證明該待測樣品被支原體污染。培養法是中國藥典收錄的方法，采用此方法可獲得比較可靠的數據。但培養法耗時長，且無法檢測到豬鼻支原體。
熒光染色法
熒光染色法是將樣品接種到專門的指示細胞中，培養一段時間后利用DNA熒光染料（例如Hoechst 33258）進行染色，正常細胞核區見邊緣整齊清晰的熒光，胞質區無熒光。支原體污染的細胞不僅在細胞核而且在細胞核外及細胞膜上均可見散在熒光。此方法同樣被中國藥典收錄，但是方法靈敏度低，重復性差，需要專門的指示細胞。
PCR法
PCR法則是通過設計相應的引物，利用PCR儀擴增對應支原體的核酸序列，也可以在常規PCR基礎上加入熒光探針或相應的熒光染料來實現實時定量。此方法可實現快速檢測，通常只需要3小時，但是細胞培養液中的物質會對PCR的擴增過程產生影響
酶活法
酶活法是通過檢測支原體特異性ATP合成相關酶的活性間接反映支原體的含量，此方法的優勢：
1）支原體識別率高，100多種支原體，只有1種不能識別，而這種支原體幾乎不會出現在體外的細胞中；
2）可以判斷出細胞的狀態；
3）不會造成假陽性或者假陰性；
4）檢測周期短；
劣勢：樣品基質中的物質可能會影響ATP酶活性，從而影響檢測結果。
自從首次在細胞培養物中發現支原體污染以來，各國監管部門始終關注這一影響生物制品安全性的因素。各國藥典或指南中詳細描述了幾種支原體的檢測方法，但是隨著生物制藥行業的快速發展和經典方法的不足，一些新穎的方法也被作為替代或者補充方法廣泛使用。不同的方法靈敏度參差不齊，當該方法用于質量放行時應被充分的驗證。
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參考文獻
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