背景：
O-糖蛋白酶（O-Glycoprotease）序列來自Akkermansia muciniphila，重組表達于E.coli，C端帶6×His標簽。O-糖蛋白酶是一種O-糖蛋白特異性內切蛋白酶，可催化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白中與O-聚體直接相鄰的肽鍵的水解。
O-糖蛋白酶作為內切蛋白酶，高度特異性地在絲氨酸或蘇氨酸的O-聚糖N端消化蛋白質。這就產生了N端攜帶O-糖鏈的糖肽，并使O-糖鏈分析、O-糖鏈定位和O-聚糖位點測定成為可能。
產品包裝：
Rhinogen?O-糖蛋白酶（O-Glycoprotease）包裝規格如下：
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目錄號 |
規格 |
制劑 |
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QIP-008 |
2000U |
凍干于20mM TBS，pH7.6中，不添加防腐劑 |
配套試劑：
配套提供的Rhinogen? α2-3,6,8,9 Neuraminidase（EDTA-free）包裝規格如下：
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目錄號 |
規格 |
制劑 |
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QPF-012 |
0.6U/30μl |
50mM NaCl，20mM Tris-HCl（pH7.5 at 25°C） |
配套提供的試劑如下：
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目錄號 |
試劑 |
成分 |
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EB10 |
10×Glyco緩沖液3 |
200mM Tris，pH6.8 |
產品來源：
Rhinogen? O-糖蛋白酶序列來源于Akkermansia muciniphila，重組表達于E. coli，理論分子量約42KD，C端帶6×His標簽。
產品質量：
1. 高穩定性：每批產品都經過嚴格的質量控制，以實現產品批間穩定性；
2. 高純度：通過SDS-PAGE檢測，O-糖蛋白酶純度≥90％，α2-3,6,8,9 Neuraminidase純度≥95%。
產品特性：
O-糖蛋白酶（O-Glycoprotease）是一種O-糖蛋白特異性內切蛋白酶，可催化天然黏蛋白型O-糖基化蛋白中與O-聚體直接相鄰的肽鍵的水解，位點在O-糖基化絲氨酸和蘇氨酸殘基的N端。
酶活定義：
與α2-3,6,8,9Neuraminidase（EDTA-free）搭配使用，在20mM Tris-HCl，pH6.8條件下，37℃孵育2小時，1單位酶（1U）可消化1μg糖蛋白（TNFR）的≥90%，通過SDS-PAGE確認。
儲存條件：
采用冰袋運輸，長期儲存請置于-20℃，重懸后2-8℃可保存1個月。避免反復多次凍融。
應用：
1. O-糖基化分析；
2. O-聚糖譜；
3. O-聚糖位點測定。
已知的O-糖蛋白酶抑制劑有哪些？
O-糖蛋白酶是一種金屬蛋白酶，因此對螯合劑（如EDTA）高度敏感，濃度>5mM會導致酶的完全抑制。ZnCl2也部分抑制O-糖蛋白酶活性。
O-糖蛋白酶是否可以和唾液酸酶合用？
是的，與唾液酸酶結合使用，可用于去唾液酸化和消化O-糖基化蛋白質，提高O-糖蛋白酶酶切效率。
必須要去除唾液酸嗎？
在唾液酸存在下，O-糖蛋白酶的活性顯著降低，因此我們建議使用唾液酸酶去除唾液酸。或對您的樣品嘗試使用和不使用唾液酸酶條件下對比消化，以評估您的特定樣品是否有必要去除唾液酸。
是否需要樣品處于天然折疊狀態？還是要進行變性處理？
如果消化不充分，可能是由于樣品的O-聚糖存在空間位阻，酶無法到達導致的。在這種情況下，我們建議嘗試以下工作流程：還原、變性、羧甲基化、置換緩沖液，然后使用O-糖蛋白酶和唾液酸酶進行消化。
說明書
COAs
MSDS